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mRNA體外轉(zhuǎn)錄合成

服務(wù)介紹  Service Introduction

        mRNA疫苗在COVID-19新型冠狀病毒傳染病的預(yù)防上起到巨大的作用而被業(yè)界所認(rèn)可，mRNA therapeutics成為了一種擁有無(wú)限前景，可能顛覆現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的基因治療平臺(tái)。與重組蛋白相比，mRNA生產(chǎn)通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄合成，更加快速靈活，低成本。在過(guò)去的十幾年里，mRNA化學(xué)修飾和遞送系統(tǒng)的重大進(jìn)展快速推動(dòng)該項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于臨床研究。mRNA 的應(yīng)用前景非常廣闊。 除了能夠用于預(yù)防傳染性疾病，mRNA 疫苗也為治療 腫瘤、免疫疾病帶來(lái)了新的星火。

        艾基生物研發(fā)了可攜帶100~150bp的長(zhǎng)鏈 polyA的載體且可以進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄的質(zhì)粒， 線性化的質(zhì)粒用于T7體外轉(zhuǎn)錄方式制備mRNA，基因長(zhǎng)度可以長(zhǎng)達(dá)2kb~3kb。經(jīng)過(guò)加帽和磁珠純化等一系列特定工藝流程，我們體外制備的mRNA分子可針對(duì)于不同的下游實(shí)驗(yàn)進(jìn)行定制以及優(yōu)化，如細(xì)胞轉(zhuǎn)染、胚胎注射、生物藥和疫苗研制等。

服務(wù)優(yōu)勢(shì)  Service Advantages

         A.   使用來(lái)源于噬菌體的T7 RNA聚合酶進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，可高效合成3 kb以上長(zhǎng)度的mRNA分子

         B.   為mRNA分子添加5’ m7G帽子和3’100nt長(zhǎng)度的 polyA尾巴，可以添加100個(gè)polyA以增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性和

               翻譯效率

         C．免費(fèi)提供不同物種的密碼子優(yōu)化，增強(qiáng)mRNA翻譯效率D． 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物經(jīng)過(guò)DNase和磷酸酶處理，去除殘留DNA

               模板和mRNA 5’磷酸基團(tuán)

載體圖譜

合成流程以及驗(yàn)證

實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

        我們的體外轉(zhuǎn)錄mRNA經(jīng)過(guò)專門優(yōu)化，加強(qiáng)了穩(wěn)定性并有助蛋白高效翻譯。下圖為使用我們?cè)O(shè)計(jì)的EGFP mRNA體外成功轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞以及純化后的mRNA電泳的案例：

293Ta-mRNA-0.5ug-轉(zhuǎn)染48h-100x-1

Cap 1帽子修飾的EGFP mRNA轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞-1

Cap 1帽子修飾的EGFP mRNA轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞-2

體外轉(zhuǎn)錄原理

左圖：反應(yīng)時(shí)間與產(chǎn)量的關(guān)系         右圖：模板投入量與產(chǎn)量的關(guān)系

運(yùn)輸/儲(chǔ)存 

        干冰運(yùn)輸，收到樣本后-80℃保存。

注意事項(xiàng)

        1.艾基提供的mRNA保存于無(wú)酶水中并通過(guò)干冰形式運(yùn)輸。

        2.接收到貨物后，請(qǐng)將mRNA放置于-80℃長(zhǎng)期保存（可穩(wěn)定保存至少6個(gè)月），或者放置于-20℃保存一周。

        3.mRNA的保質(zhì)期為1年。請(qǐng)勿反復(fù)凍融mRNA，否則將導(dǎo)致其顯著降解。