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技術(shù)支持

致力于引進(jìn)國(guó)外先進(jìn)技術(shù),為廣大科研工作者和醫(yī)療機(jī)構(gòu)提供高質(zhì)量 的科研技術(shù)支持 。

樣品制備指南

高通量測(cè)序樣品

樣品制備指南


動(dòng)植物基因組de novo 測(cè)序

 

樣品總量:小片段文庫(kù)樣本制備需要總量大于1 μg 的樣品,mate-pair 文庫(kù)(2 kb、5 kb、10 kb、)樣品,制備需要總量20-50 μg ,

為保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量及延續(xù)性,請(qǐng)一次性提供至少2 次樣本制備總量;

樣品濃度純度:樣品濃度>200 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之間,無(wú)蛋白質(zhì)、RNA 或者肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)污染;

樣品質(zhì)量:基因組完整、無(wú)降解,電泳結(jié)果基因組DNA 主帶應(yīng)在入-Hind llldigest 最大條帶23 KB 以上且主帶清晰,無(wú)彌散;

樣品保存:請(qǐng)保存于干粉、酒精、TE buffer 或超純水中,并請(qǐng)?jiān)跇悠沸畔沃凶⒚鳌?/p>

 

動(dòng)植物基因組重測(cè)序

 

DNA 樣品總量:每次建庫(kù)需要準(zhǔn)備樣品1 μg,建議單次送樣提供2 次制備總量;

樣品濃度和純度:樣品濃度>50 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之間,無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)污染,基因組完整、無(wú)降解,電泳中DNA 主帶

應(yīng)大于23 kb;

樣品選擇:對(duì)于植物樣品建議選取黑暗培養(yǎng)的黃化苗或嫩苗,動(dòng)物樣品應(yīng)選擇肌肉、血等脂肪含量較少的組織進(jìn)行取樣;

樣品保存:請(qǐng)選擇干粉、酒精、TE 或超純水的保存方式。

 

全外顯子組及目標(biāo)區(qū)域重測(cè)序

 

DNA 樣品總量:請(qǐng)一次性提供至少1 μg 高質(zhì)量的基因組DNA;

樣品濃度和純度:樣品濃度>50 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之間,無(wú)肉眼可見(jiàn)污染;

樣品質(zhì)量:基因組完整、無(wú)降解,電泳中DNA 主帶應(yīng)大于23 kb;

樣品選擇:對(duì)于植物樣品建議選取黑暗培養(yǎng)的黃化苗或嫩苗,動(dòng)物樣品應(yīng)選擇肌肉、血等脂肪含量較少的組織進(jìn)行取樣;

樣品保存:請(qǐng)選擇干粉、酒精、TE 或超純水中進(jìn)行保存。

 

微生物基因組de novo 測(cè)序

 

DNA 樣品總量:小片段文庫(kù)樣品制備需要總量3 μg 的樣品,mate-pair 文庫(kù)(2 kb、5 kb、10 kb)樣品制備需要10-50 μg 的樣

品, 為保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量及延續(xù)性,請(qǐng)一次性提供至少2 次樣品制備量;

樣品濃度和純度:樣品濃度>100 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之間,無(wú)肉眼可見(jiàn)污染;

樣品質(zhì)量:基因組完整、無(wú)降解;

樣品選擇:對(duì)于細(xì)菌和真菌樣品,希望盡量來(lái)自于同一個(gè)菌株,不要有宿主DNA 污染;

樣品保存:請(qǐng)選擇干粉、酒精、TE 或超純水的保存方式之一。

 

轉(zhuǎn)錄組測(cè)序


轉(zhuǎn)錄組樣品:RNA 樣品總量: ≥ 1.0 μg,RNA 樣品濃度: ≥ 50 ng/μl;

樣品濃度和純度:樣品濃度>100 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之間,無(wú)肉眼可見(jiàn)污染;

樣品質(zhì)量:使用Agilent Bioanalyzer 儀器檢測(cè),則獲得的總的RNA 28S:18S >1,RIN 動(dòng)物>7,RIN 植物 >6.5;

樣品選擇:對(duì)于細(xì)菌和真菌樣品,希望盡量來(lái)自于同一個(gè)菌株,不要有宿主DNA 污染;

樣品保存:請(qǐng)選擇乙醇、DEPC 水保存樣品,并在樣品信息單中注明;

樣品運(yùn)輸:樣品請(qǐng)置于1.5 ml 管中,并使用封口膜封好后干冰運(yùn)輸, 請(qǐng)勿反復(fù)凍融。


小RNA 測(cè)序


RNA 樣品總量:一次性提供至少3 μg 高質(zhì)量的總RNA;

樣品濃度和純度:樣品濃度>100 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之間,無(wú)肉眼可見(jiàn)污染;

樣品質(zhì)量:使用Agilent Bioanalyzer 儀器檢測(cè),則獲得的總的RNA 28S:18S >1,RNA>7.5;

樣品保存:請(qǐng)選擇乙醇、DEPC 水保存樣品,并在樣品信息單中注明;

樣品運(yùn)輸:樣品請(qǐng)置于1.5 ml 管中,并使用封口膜封好,放置足夠的干冰運(yùn)輸。

 

lncRNA 測(cè)序

 

轉(zhuǎn)錄組樣品:RNA 樣品總量 ≥ 2.0 μg,RNA 樣品濃度 ≥ 100 ng/μl;

樣品濃度和純度:樣品濃度>100 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之間,無(wú)肉眼可見(jiàn)污染;

樣品質(zhì)量:使用Agilent Bioanalyzer 儀器檢測(cè),則獲得的總的RNA 28S:18S>1,RIN 值 >7.5;

樣品選擇:對(duì)于細(xì)菌和真菌樣品,希望盡量來(lái)自于同一個(gè)菌株,不要有宿主DNA 污染;

樣品保存:請(qǐng)選擇乙醇、DEPC 水保存樣品,并在樣品信息單中注明;

樣品運(yùn)輸:樣品請(qǐng)置于1.5 ml 管中,并使用封口膜封好后干冰運(yùn)輸,請(qǐng)勿反復(fù)凍融。

 

表觀遺傳學(xué)相關(guān)DNA 測(cè)序

 

DNA 樣品總量:全基因甲基化測(cè)序需提供3 μg 的基因組DNA,RRBS 需提供至少4 μg 的DNA,ChIP-seq 和MeIDP-seq 需提供

至少30 ng 的抗體富集后的DNA 片段樣品(片段長(zhǎng)度200-500 bp),為保證質(zhì)量和延續(xù)性,請(qǐng)一次性提供至少2 次樣本制備量;

樣品濃度和純度:基因組DNA 樣品濃度>100 ng/μl,富集后DNA 樣品濃度>5 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之間,無(wú)肉眼可見(jiàn)污染;

樣品保存:請(qǐng)選擇乙醇、純水進(jìn)行保存,并在樣品信息單中注明;

樣品運(yùn)輸:請(qǐng)將樣品置于1.5 ml 管中,并用封口膜封好。

 

宏基因組測(cè)序

 

樣品總量:環(huán)境細(xì)菌多樣性分類一次文庫(kù)制備所需要的樣品量為1 μg DNA,宏基因組測(cè)序一次文庫(kù)制備所需要的樣品量為3 μg DNA,

為保證實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量及延續(xù)性,請(qǐng)一次性提供至少兩次的制備量(注:不同環(huán)境DNA 質(zhì)量差別較大,具體樣品量請(qǐng)咨詢當(dāng)?shù)丶夹g(shù)人員);

樣品濃度和純度:環(huán)境樣品濃度>50 ng/μl,宏基因組為30 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之間,無(wú)蛋白質(zhì)、RNA 或肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)污染;

樣品質(zhì)量:基因組完整、無(wú)降解,電泳結(jié)果基因組DNA 主帶在預(yù)期位置,清晰,無(wú)彌散,cDNA 片段化樣品,片段大小符合預(yù)期位置;

樣品保存:請(qǐng)選擇干粉、酒精、TE buffer 或超純水一種,并在樣品信息單中注明;

樣品運(yùn)輸:請(qǐng)將樣品置于1.5 ml 管中,做好標(biāo)記,并用封口膜好,并同《測(cè)序樣品訂單》一起放在塑料樣品袋封口,基因組DNA 如果

用乙醇沉淀,可以常溫運(yùn)輸。

 

雙酶切RAD 測(cè)序

 

客戶提供:目的物種的基因組信息或近源參考基因組的信息,限制性內(nèi)切酶的種類信息;

樣品總量:每個(gè)樣品制備需要大于3 μg 的樣品,為保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量及延續(xù)性,請(qǐng)一次性提供至少4 μg 的樣品;

樣品濃度和純度:樣品濃度>50 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之間,無(wú)蛋白質(zhì)、RNA 或肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)污染;

樣品質(zhì)量:基因組完整、無(wú)降解,電泳結(jié)果基因組DNA 主帶應(yīng)在-Hind III digest 最大條帶23 kb 以上且主帶清晰,無(wú)彌散;

樣品保存:請(qǐng)選擇干粉、酒精、TE buffer 或超純水一種,并在樣品信息單中注明。

 

細(xì)胞器基因組de novo 測(cè)序

 

樣品總量:使用密度梯度離心分離后的樣品一次制備DNA 文庫(kù)的量至少為0.5 μg DNA,PCR 富集方法樣品一次制備需要至少

200 ng DNA,建議客戶提供兩次計(jì)品的總量;

樣品濃度和純度:OD260/280 介于1.8-2.0 之間,無(wú)蛋白質(zhì)、RNA 或肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)污染;

樣品質(zhì)量:基因組完整、無(wú)降解,電泳結(jié)果基因組DNA 主帶清晰,無(wú)彌散;

樣品保存:請(qǐng)選擇干粉、酒精、TE buffer 或超純水一種,并在樣品信息單中注明。

 

擴(kuò)增子測(cè)序

 

常見(jiàn)環(huán)境樣本(請(qǐng)使用干冰或冰袋運(yùn)送):土壤、淤泥、沉積物 ≥ 3 g,糞便 ≥ 500 mg,組織樣本 ≥ 1g;

水體送樣為過(guò)濾后的濾膜( 最適濾膜直徑3-4 cm,孔徑大小一般選擇0.22 μm 或者0.45 μm);

拭子樣本 ≥ 2 個(gè);

DNA/PCR 產(chǎn)物(請(qǐng)使用干冰或冰袋運(yùn)送);

DNA:濃度 ≥ 5 ng/μl,總量 ≥ 150 ng,DNA 要有明顯主帶,無(wú)降解,無(wú)RNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)污染;

PCR 產(chǎn)物:濃度 ≥ 20 ng/μl,總量 ≥ 400 ng,片段大?。?450 bp,條帶單一,無(wú)降解,無(wú)引物二聚體。




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