服務(wù)介紹 Service Introduction
基因組de novo 測序,即基因組從頭測序,是指不依賴已知的基因組序列信息,對某個物種的全基因組序列進行測序,然后利用生 物信息學手段對測序序列進行拼接、組裝,從而獲得該物種的全基因組序列圖譜。全基因組序列圖譜的構(gòu)建將全面加深對該物種起源進化 以及對特定環(huán)境適應(yīng)性過程的理解,為今后在該物種內(nèi)發(fā)現(xiàn)新基因以及物種改良起到巨大的作用,為基因組學研究搭建一個高效的平臺; 為后續(xù)的基因挖掘、功能驗證提供 DNA 序列信息。
通過漫長的物種形成和進化,不同的物種基因組的雜合度和基因組上的重復區(qū)域不盡相同。一般雜合度不超過 0.5%、重復序列含量 不超過 50%、GC 含量為 35% 到 65% 之間的單倍體或二倍體動植物基因組定義為簡單基因組。而動植物復雜基因組是指 GC 含量小于 35% 或大于 65%,重復序列高于 50% 或雜合率大于 0.5% 的二倍體或多倍體的動植物基因組。
利用 illumina 測序技術(shù),構(gòu)建插入片段大小為 180 bp、300 bp、500 bp、2 kb、5 kb、10 kb、20 kb 等大小不同的測序文庫, 進行 125 bp/150 bp/250 bp 的雙末端測序。其中插入片段長度超過 1 kb 的文庫稱之為 mate-pair 文庫,長片段文庫的構(gòu)建便于基因組 組裝過程中的重復序列定位。當測序的總體深度達到 70× 以上時,即可保證基因組拼接所需數(shù)據(jù)及序列中單堿基的準確性。
技術(shù)流程 Technical Procedures
提供的服務(wù) Services
基因組調(diào)查:評估基因組的 GC 含量、重復度、雜合度,并估計基因組的大小。
基因組拼接統(tǒng)計:拼接統(tǒng)計,包括原始數(shù)據(jù)統(tǒng)計、測序深度、Contig N50、Scaffold N50、基因組 GC 含量等。
基因組注釋及基因功能分類:包括基因預測、功能注釋、ncRNA 注釋、重復序列分析以及 GO 分類、KEGG 通路分析。
比較基因組及進化分析:核苷酸水平共線性分析,氨基酸水平共線性分析,基因簇分析以及進化關(guān)系。
組裝評估標準 Assembly Evaluation Standard
樣品要求 Sample Requirements
實驗類型 | DNA樣品總量 | 樣品濃度和純度 | 樣品保存 | 樣品質(zhì)量 |
動植物基因組de novo 測序 | 小片段文庫樣本制備需要總量大于 1 μg 的樣品,mate-pair 文庫(2 kb、5 kb、10 kb、)樣品,制備需要總量 20-50 μg | 樣品濃度 >200 ng/μl,OD260/280 介于 1.8-2.0 之間,無蛋白質(zhì)、RNA 或者肉眼可見雜質(zhì)污染 | 請保存于干粉、酒精、TE buffer 或超純水中,并請在樣品信息單中注明 | 基因組完整、無降解,電泳結(jié)果基因組 DNA 主帶應(yīng)在入 -Hind llldigest 最大條帶 23 KB 以上且主帶清晰,無彌散 |