技術(shù)支持
致力于引進(jìn)國外先進(jìn)技術(shù),為廣大科研工作者和醫(yī)療機(jī)構(gòu)提供高質(zhì)量 的科研技術(shù)支持 。
Sanger 測序
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基因合成
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高通量測序
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分子生物學(xué)
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引物合成
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質(zhì)粒上有兩個polyA序列,一個是BGHpA,一個是SV40pA,這兩個有什么區(qū)別?
BGHpA是牛生長因子polyA(BGH聚腺苷酸化信號序列):可以有效終止轉(zhuǎn)錄和mRNA聚腺苷酸化的牛生長因子(BGH)聚腺苷酸化信號序列,多聚腺苷酸尾(或聚A尾)保護(hù)mRNA,免受核酸外切酶攻擊,并且對轉(zhuǎn)錄終結(jié)、將mRNA從細(xì)胞核輸出及進(jìn)行翻譯。而SV40pA是猴空泡病毒polyA(SV40早期poly-A信號序列)以及SV40晚期poly (A)序列。SV40 PolyA(猴空泡病毒PolyA,簡稱PolyA)序列是有轉(zhuǎn)錄終止作用和使轉(zhuǎn)錄的mRNA添加PolyA尾的DNA序列(240 bp),含有AATAAA六核苷酸多腺苷化信
我想用真核細(xì)胞表達(dá)我的基因片段,假如我的基因片段插在多克隆位點(diǎn)上,但是多克隆位點(diǎn)與真核啟動子之間隔了一個原核的T7啟動子,就是我的目的基因與啟動子之間隔了一個原核的啟動子,這樣我的基因還能表達(dá)嗎?
某些真核表達(dá)載體上同時存在CMV啟動子和T7啟動子例如:在pcDNA3.1/myc-His系列載體中CMV啟動子位于209~863,而T7啟動子則位于863~882,這樣目的基因就可以在含有T7 RNA 聚合酶基因的宿主菌表達(dá)。在宿主細(xì)菌細(xì)胞或體外轉(zhuǎn)錄中,質(zhì)粒DNA可以利用T7啟動子驅(qū)動基因表達(dá),而在哺乳動物細(xì)胞中,轉(zhuǎn)基因表達(dá)由CMV啟動子驅(qū)動。而T7 啟動子在這個商業(yè)化載體pCDNA3.1(+)中常被用于測序。所以,若是使用真核載體pCDNA3.1(+)或者pCDNA3.1(-)的話,一般情況下是不會影響基因的表達(dá)。
請問你們的細(xì)菌有T7 polymerase可以直接在該細(xì)菌上表達(dá)克隆基因的嗎?
具有T7 polymerase的表達(dá)菌株,本司常備有BL21(DE3)和BL21(pLysS)兩種表達(dá)菌株: BL21(DE3):表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達(dá)載體(如pET系列)的非毒性基因。 BL21(pLysS):pLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因,適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。
密碼子優(yōu)化過的基因,艾基生物是否還提供蛋白表達(dá)服務(wù)?
艾基生物同時可為合成的基因提供蛋白表達(dá)及純化服務(wù)。艾基生物提供四大蛋白表達(dá)系統(tǒng):原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)、酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)、桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)及哺乳動物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)。若需要訂購蛋白表達(dá)服務(wù),會有相關(guān)業(yè)務(wù)員跟進(jìn)關(guān)于蛋白純白條件摸索以及蛋白純化等等工作以及報(bào)價。
艾基生物是否免費(fèi)提供自備載體驗(yàn)證服務(wù)?
在艾基生物訂購質(zhì)粒構(gòu)建服務(wù),可為您免費(fèi)提供一個反應(yīng)(正常情況下可測序驗(yàn)證插入的MCS區(qū)域)的載體測序驗(yàn)證服務(wù)。若測序驗(yàn)證由于您提供的樣品或樣品信息出現(xiàn)問題時,需要加測反應(yīng),則有您承擔(dān)加測費(fèi)用。
提供的質(zhì)粒量太少了,能不能多提供一些?
客戶在下訂單的時候可以自行標(biāo)注多所需要發(fā)貨量,我們盡量滿足合理范圍內(nèi)所有要求
如何使用艾基生物基因合成或克隆構(gòu)建交付的項(xiàng)目樣品,交付的項(xiàng)目樣品類型都有哪些?
如您在艾基生物訂購基因合成、克隆構(gòu)建、定點(diǎn)突變等質(zhì)粒構(gòu)建的項(xiàng)目,將會為您提供經(jīng)測序驗(yàn)證的質(zhì)粒1-2ug,含重組質(zhì)粒的新鮮菌液和甘油菌。 A. 質(zhì)粒· 樣品形式為液體,含有少量的Tris-Hcl,不影響測序和酶切。一般高拷貝載體濃度在100-250ng/μl,而低拷貝載體濃度在50-100ng/μl,具體見標(biāo)簽上注明的濃度,提供總量約1~2ug?!?使用方法:可以直接進(jìn)行酶切和測序,也可進(jìn)行轉(zhuǎn)化(用量為0.5 ul~1 ul)?!?保存:建議-70℃長期保存。B. 新鮮菌液· 樣品形式為新鮮菌液(不含甘油),可接種于新鮮的培養(yǎng)液中37℃過夜培養(yǎng)后直接提取質(zhì)粒?!?菌株為Match-T1,JM109,DH10B,該菌株為非甲基化缺陷型菌株,使用限制性內(nèi)切酶處理樣品時,…
基因合成服務(wù)提供的數(shù)據(jù)報(bào)告包含哪些文件,每個文件需要使用什么軟件打開?
您所收到的基因合成服務(wù)數(shù)據(jù)報(bào)告是ZIP格式的壓縮文件,可以使用Winrar(4.0以上版本)打開,數(shù)據(jù)報(bào)告一般含有7類文件,包含測序原始圖譜、序列比對文件和質(zhì)粒圖譜及序列。分別為: 1. *.abl 文件為 ABI 3730 序列圖譜,是測序結(jié)果的峰圖文件,可使用 Chromas 或其它相關(guān)軟件查看。 Chromas 軟件可在以下地址免費(fèi)下載: http://www.technelysium.com.au/chromas_lite.html 2. *.seq 文件為*.abl 峰圖文件對應(yīng)的序列文件,可以使用 TXT 文檔等相關(guān)軟件打開。 3. *.cm5 文件為您的質(zhì)粒圖譜,該文件必須使用 Clone Manager 5 及以上版本查看及編輯。 4. 如果您無法使用 Clone Manager,我們?yōu)槟峁┝艘粋€*.gbk 文件,該文件為 genbank 格式…
在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中,哪種終止密碼子具有偏好性?在哺乳動物系統(tǒng)中呢?
在大腸桿菌中,TAG很少用;經(jīng)常使用的是TAA;TGA也可以。在哺乳動物中,TGA的使用頻率高于TAA和TAG。相對于哺乳動物和大腸桿菌之間的不同,密碼子使用表在哺乳動物不同有機(jī)體間的區(qū)別不是很大。
如想在兩種不同的宿主中表達(dá)目的蛋白,艾基生物是否能夠在兩種宿主中進(jìn)行優(yōu)化?
可以。我們的優(yōu)化工具可以幫助您同時針對兩個不同宿主物種進(jìn)行基因優(yōu)化。該工具可同時載入兩個宿主的密碼子偏向性和順勢作用元件等優(yōu)化參數(shù),雙宿主優(yōu)化算法會搜尋兩個宿主表達(dá)的平衡點(diǎn),以求在兩個宿主中都可以得到令人滿意的蛋白表達(dá)量。但是在兩個宿主物種的親緣關(guān)系比較遠(yuǎn)等情況下,雙宿主基因優(yōu)化則很有可能在兩個宿主中都得不到理想的優(yōu)化結(jié)果。如果您在您的雙宿主優(yōu)化結(jié)果中發(fā)現(xiàn)了CAI小于0.80,大量順勢作用元件沒有被過濾掉,或其他可能影響基因表達(dá)的現(xiàn)象,我們推薦您針對兩個宿主分別使用我們的單一宿主優(yōu)化方法。
如需基因優(yōu)化,我需要提供哪些信息?
若需基因優(yōu)化,我們需要您提供如下信息:a.被優(yōu)化的基因序列或者蛋白序列;b.優(yōu)化的宿主(物種,例如:人、小鼠、茄子等等);c.基因兩端需添加的酶切位點(diǎn)或者基因內(nèi)部需避免的酶切位點(diǎn);d.是否需要特定的終止密碼子;e.是否需添加Kozak序列,對于哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)我們一般建議您添加Kozak序列。
密碼子優(yōu)化有必要嗎?
對于用于蛋白表達(dá)的基因來說,多數(shù)情況下是有必要的。如真核生物的基因需要在原核生物中表達(dá)。由于真核生物的密碼子偏好和原核生物有很大不同,對基因進(jìn)行密碼子優(yōu)化將顯著提高表達(dá)效率。
構(gòu)建后的質(zhì)粒以及項(xiàng)目相關(guān)信息,艾基生物會保留嗎?會保留多久?
您的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、質(zhì)粒及甘油菌艾基生物將為您保存1個月,請您拿到樣品后盡快驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
訂購定點(diǎn)突變項(xiàng)目,需要提供什么信息?為什么突變一個點(diǎn),收費(fèi)會比目錄價更貴?
需提供改造前載體的相關(guān)信息(質(zhì)粒圖譜、全序列、多克隆位點(diǎn)、克隆位點(diǎn)上下游50 bp序列的驗(yàn)證結(jié)果),并注明突變的氨基酸序列以及突變位點(diǎn)。若突變的序列較長或無適合的酶切位點(diǎn),會按照克隆長度進(jìn)行分析報(bào)價,相對而已收費(fèi)比目錄價更貴一些。
訂購克隆構(gòu)建項(xiàng)目,需要提供什么信息?
需要您明確告知克隆要求,并確保提供信息的正確性。需提供改造前載體的相關(guān)信息(質(zhì)粒圖譜、全序列、多克隆位點(diǎn)、克隆位點(diǎn)上下游50 bp序列的驗(yàn)證結(jié)果),并注明使用時是否有特殊要求;模板相關(guān)信息(模板類型、模板序列、模板驗(yàn)證結(jié)果);構(gòu)建后的質(zhì)粒信息(構(gòu)建后質(zhì)粒命名、構(gòu)建后質(zhì)粒序列)
艾基生物可以將合成的基因克隆至我指定的載體嗎?
可以。但如非艾基生物常備的其它的載體需要由客戶自己提供。如果您需要將合成的基因克隆到您指定的載體上,需要您提供載體相關(guān)信息(質(zhì)粒圖譜、全序列、多克隆位點(diǎn)、克隆位點(diǎn)上下游50bp序列的驗(yàn)證結(jié)果),若無法提供測序結(jié)果,我司會提供測序驗(yàn)證的服務(wù),我們會根據(jù)目的基因的長度,載體構(gòu)建的難度加收部分亞克隆費(fèi)用(除部分免克隆費(fèi)的載體)。
pGSI載體和其他免費(fèi)克隆載體什么區(qū)別?在什么情況下,艾基生物建議使用pGSI載體?
艾基生物基因合成服務(wù)為客戶免費(fèi)提供pGSI,pBluescript II SK(-),pUC19,pUC57,pcDNA3.1(+) 5種克隆載體。pGSI是由pBluescript II SK改造過的, 除去了它的多酶切克隆位點(diǎn),只保留SmaI、EcoRV、XhoI 3種克隆位點(diǎn)。如客戶對克隆載體和克隆位點(diǎn)沒有特殊要求,我們將會默認(rèn)把目的基因片段平端克隆到pGSI的SmaI位點(diǎn)。如果客戶要求避免一些載體上常用的酶切位點(diǎn)以方便后續(xù)的亞克隆需求,我們可保證構(gòu)建后的質(zhì)粒上不出現(xiàn)指定的酶切位點(diǎn)。
艾基生物能合成多長的基因?
沒有長度限制,艾基生物可為您合成長達(dá)10 kb及以上的基因序列。且艾基生物已挑戰(zhàn)合成成功的基因有:長達(dá)30 kb的基因(分段組裝);>90%高GC含量或<10%高AT含量的基因;重復(fù)片段基因;強(qiáng)二聚體結(jié)構(gòu)的基因;含50多個連續(xù)腺嘌呤的基因 (aaaaaaa……)等幾千種復(fù)雜基因。
艾基生物基因合成服務(wù)的優(yōu)勢有哪些?
艾基生物基因合成服務(wù)主要競爭優(yōu)勢:①基因合成平臺:可以合成任何基因,包括高度重復(fù)(正向/反向)序列、AT/GC rich 序列、發(fā)夾結(jié)構(gòu)、連續(xù)單一堿基重復(fù)等富含特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜基因、毒性基因等②特殊的克隆策略:采用無縫隙克隆組裝技術(shù),可將合成的基因插入到任意載體的任一位置。③客戶信息安全保證:艾基生物基因合成周期短,特有的安全制度保證客戶的信息安全,公司嚴(yán)格按照與客戶簽定的基因合成服務(wù)協(xié)議和保密合同執(zhí)行服務(wù);④良好的客戶信任度:服務(wù)質(zhì)量可靠,提供DNA測序結(jié)果,保證所合成的基因序列100%準(zhǔn)確。艾基生物為客戶合成的許多基因以及提供的密碼子優(yōu)化后序列合成,在其發(fā)表的高水平文章中得到引用。
與傳統(tǒng)PCR克隆相比,基因合成有什么優(yōu)點(diǎn)?
基因合成有如下優(yōu)點(diǎn):①專業(yè)的密碼子優(yōu)化技術(shù)提高了蛋白的表達(dá)量及可溶性;②成本效益低,通過普通PCR克隆方法構(gòu)建組織特異性cDNA文庫是費(fèi)時費(fèi)錢的;③基因合成獲得的基因無突變、準(zhǔn)確,普通PCR產(chǎn)生非預(yù)期結(jié)果的可能性大,從而影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行;④不需要依賴模板以及載體酶切位點(diǎn)的限制。