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有的細(xì)胞特別大或特別小，特別是一些原代細(xì)胞，還有的細(xì)胞成團(tuán)無法計(jì)數(shù)。對于這種細(xì)胞，從預(yù)實(shí)驗(yàn)開始就會有所不同。預(yù)實(shí)驗(yàn)時，保持感染時細(xì)胞的匯合率達(dá)到30~40%，即使細(xì)胞沒有預(yù)定的10000 個/孔的數(shù)目，正式實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞匯合率應(yīng)盡量控制在這個數(shù)量。對于成團(tuán)的細(xì)胞，如胰島細(xì)胞，胚胎干細(xì)胞等，應(yīng)注意細(xì)胞團(tuán)的數(shù)目和大小，以便以后的實(shí)驗(yàn)按比例放大。

Lentivirus可能對您的目的細(xì)胞有一定的毒性，請調(diào)整并降低感染的MOI值，并且在感染4 h、8 h、12 h后對細(xì)胞進(jìn)行換液，用新鮮的完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)觀察。

目的細(xì)胞中GFP熒光強(qiáng)度取決于病毒感染細(xì)胞的顆粒數(shù)、細(xì)胞本身的增殖狀態(tài)、細(xì)胞類型以及觀察時間等。一般來講，目的細(xì)胞感染病毒顆粒數(shù)越多，細(xì)胞本身增殖越快，GFP熒光會較強(qiáng)。Lentivirus屬于慢病毒，一般在增殖較快的細(xì)胞中病毒感染48~72h后，GFP基因表達(dá)才達(dá)到高峰。對于增殖較慢的細(xì)胞，GFP基因表達(dá)時間還會延長。

一般我們通過提高M(jìn)OI值來提高病毒的轉(zhuǎn)染效率，必要時可在培養(yǎng)液中加入Polybrene (4~10 μg/mL)來提高病毒的感染率。同時，目的細(xì)胞良好的生長狀態(tài)是獲得正常感染效率的保證。

常見細(xì)胞推薦的MOI

艾基提供的Lentiviral Vector Particle為VSVG膜蛋白包裹的，雖然與其他的膜蛋白相比，它能夠感染的細(xì)胞種類大大增加，但是對不同的細(xì)胞和組織的感染性仍有差別。在使用Lentivirus之前請查閱相關(guān)文獻(xiàn)，了解這種Lentivirus對目的細(xì)胞的親嗜性，復(fù)感染指數(shù)（MOI值）以及在體內(nèi)（in vivo）注射所需要的病毒量。如果沒有相關(guān)文獻(xiàn)支持，則需要檢測病毒對目的細(xì)胞的親嗜性。實(shí)際上即使有文獻(xiàn)支持，但因?yàn)椴煌瑢?shí)驗(yàn)的細(xì)胞代數(shù)，個體差異，細(xì)胞狀態(tài)的關(guān)系，細(xì)胞實(shí)際的MOI和文獻(xiàn)報(bào)道的往往會有差異。因此，正式實(shí)驗(yàn)前一般會安排預(yù)實(shí)驗(yàn)，以了解細(xì)胞所需MOI以及病毒對細(xì)胞狀態(tài)和傳代的影響。1. 目的細(xì)胞感染預(yù)實(shí)驗(yàn) 說明：MOI值：感染復(fù)數(shù)或…

艾基提供的慢病毒載體屬于“第二代”慢病毒載體，其基因組的3’ LTR的增強(qiáng)子功能發(fā)生了缺失，從而形成了所謂的“自滅活”（Self-inactivation，SIN），即該病毒基因組整合到細(xì)胞基因組后，不會產(chǎn)生新的子代病毒，也降低了對周圍基因的意外激活，因此具有較好的安全性。但該病毒仍然具有可能的潛在的生物學(xué)危險(xiǎn)，所以建議不要使用編碼已知或可能會致癌的基因的假型病毒。除非已經(jīng)完全公認(rèn)某個基因肯定沒有致癌性，否則均不建議采用假型病毒進(jìn)行生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，如有疑問，請與我們聯(lián)系。使用時請參照如下所示進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：1. 病毒操作時請使用生物安全柜（BSL-2）。2. 病毒操作時請穿實(shí)驗(yàn)服，戴口罩和手套。3. 操作病毒時應(yīng)小心，避免…

1. 收到病毒液后4℃保存(請于一周內(nèi)用完)，如需長期保存則存放于-80℃。避免反復(fù)凍融，否則會降低病毒滴度，一般病毒可以存放于-80℃約6個月。6個月后使用，請重新檢測病毒滴度。2. 艾基提供的Lentivirus溶于HBSS中 (pH7.4) 。病毒使用時，請將病毒從-80℃冰箱取出，冰浴融化，4℃存放。如有需要稀釋病毒，則可加入適量的HBSS混勻使用，也可以用培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋。3. “TU/mL”：Transducing Units，轉(zhuǎn)導(dǎo)單位，表示可以感染并進(jìn)入到目標(biāo)細(xì)胞群中的病毒基因組數(shù)。艾基提供的慢病毒單位標(biāo)識為TU/mL時，即每毫升慢病毒溶液中含有具有生物活性的慢病毒顆粒數(shù)。如：病毒滴度>1×10∧8 TU/mL，即每毫升病毒液中至少含有1×10∧8個具有…