不可以，轉(zhuǎn)染是通過物理或化學(xué)方法將外源 DNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞的過程，磷酸鈣轉(zhuǎn)染法和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法為例，兩種方法都需要在轉(zhuǎn)染24h 前進(jìn)行細(xì)胞傳代，且細(xì)胞密度達(dá)到70%-80%方可進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。而細(xì)胞復(fù)蘇后， 細(xì)胞未達(dá)到最佳的狀態(tài)，活力為完全恢復(fù)，細(xì)胞密度未達(dá)到要求，故而不可用復(fù)蘇細(xì)胞直接加質(zhì)粒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

       是的，細(xì)胞密度會(huì)影響轉(zhuǎn)染性能。細(xì)胞匯合度在 70-90％時(shí)具有優(yōu)異的轉(zhuǎn)染性能

        傳代次數(shù)可能會(huì)影響轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。傳代次數(shù)過多可能會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率。我們不推薦超過20-30 次傳代的細(xì)胞。如果轉(zhuǎn)染性能下降并且細(xì)胞已經(jīng)培養(yǎng)過很長(zhǎng)時(shí)間或過度不當(dāng)傳代，我們建議您從液氮中復(fù)蘇一管新細(xì)胞重新培養(yǎng)。

        同一種轉(zhuǎn)染試劑對(duì)于不同的細(xì)胞系和細(xì)胞，其轉(zhuǎn)染效果都不一樣，建議您查看相關(guān)推薦后選擇最適合的轉(zhuǎn)染試劑。

        一般情況下，無論如何嘗試控制轉(zhuǎn)染影響因素，兩次轉(zhuǎn)染的效率仍會(huì)表現(xiàn)出一定程度的差異性。轉(zhuǎn)染時(shí)，請(qǐng)保持所有轉(zhuǎn)染條件基本一致，如細(xì)胞匯合度、傳代次數(shù)和質(zhì)粒添加量等。盡可能使用代次低的細(xì)胞。

        瞬時(shí)轉(zhuǎn)染克隆的表達(dá)水平通常比較高，因?yàn)樗矔r(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞通常具有較高的外源基因拷貝數(shù)（每個(gè)細(xì)胞幾百個(gè)）。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆通常有 1-2 個(gè)拷貝整合進(jìn)基因組，因此其表達(dá)水平較低。有時(shí)候，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá)水平低是因?yàn)楫?dāng)組成型表達(dá)重組蛋白時(shí)對(duì)細(xì)胞造成了負(fù)面影響。

        脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染過程中不是必須需使用無血清培養(yǎng)基。但是血清會(huì)影響復(fù)合物的形成，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)可能會(huì)干擾復(fù)合體的形成。一旦復(fù)合體形成，即可將其加入到含血清培養(yǎng)基的細(xì)胞中。

        不可以，抗生素，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些抗生素一般對(duì)于真核細(xì)胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用抗生素，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用抗生素。

        需要去內(nèi)毒素，因?yàn)閮?nèi)毒素會(huì)對(duì)細(xì)胞造成傷害，嚴(yán)重的甚至殺死細(xì)胞。在提取質(zhì)粒的過程中，可能會(huì)殘留有細(xì)菌（如大腸桿菌）產(chǎn)生的內(nèi)毒素，內(nèi)毒素水平增加可導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率的大幅下降。

        A260 / A280 值大于或等于 1.8，意味著該質(zhì)粒 DNA 是純的；A260 / A280 讀數(shù)小于 1.8，表明樣品可能被芳香族產(chǎn)物（即苯酚）或蛋白質(zhì)污染；讀數(shù)大于 2.0，則表明樣品被 RNA 污染。

        對(duì)于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染的 DNA 沒有整合到宿主基因組中，所以外源 DNA 在后續(xù)的細(xì)胞有絲分裂階段將丟失。外源基因的表達(dá)是短暫的（最長(zhǎng) 7-10 天），但表達(dá)水平很高，因?yàn)樵谕粋€(gè)細(xì)胞里會(huì)有多個(gè)拷貝的 DNA。對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染的 DNA 能夠整合到宿主基因組，因此轉(zhuǎn)染細(xì)胞及其子代細(xì)胞的基因組中會(huì)同時(shí)保留轉(zhuǎn)染的 DNA。外源基因也會(huì)隨著篩選過程而表達(dá)。由于每個(gè)細(xì)胞中只整合了 1-2 個(gè) DNA 拷貝，所以表達(dá)水平較低。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率只有瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的 1-10％。

        一般效果在 1 周內(nèi),傳不了幾代就丟失了,功能性實(shí)驗(yàn)做不了，要想超過 1 個(gè)周最好用病毒感染細(xì)胞，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。

        脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染的主要優(yōu)勢(shì)是能取得更高的轉(zhuǎn)染效率，即使是不能使用磷酸鈣介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型。此外，脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染不僅能用于寡聚核苷酸到大 DNA 范圍內(nèi)的 DNA 遞送，還能遞送 RNA 和蛋白質(zhì)。

        質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法用于某些細(xì)胞類型，例如非分裂細(xì)胞，而病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)既能用于分裂細(xì)胞又能用于非分裂細(xì)胞，比如難以轉(zhuǎn)染的神經(jīng)細(xì)胞。

        轉(zhuǎn)細(xì)胞的質(zhì)粒是不會(huì)復(fù)制的，真核生物沒有這種機(jī)制，因此會(huì)隨著細(xì)胞的生長(zhǎng)分裂，質(zhì)粒會(huì)逐漸丟失，只有整合到基因組的才會(huì)隨著細(xì)胞增殖而復(fù)制。

        瞬時(shí)轉(zhuǎn)染是指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過某種方式導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)（主要指HEK293細(xì)胞），該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細(xì)胞自身的基因組上。隨著細(xì)胞的生長(zhǎng)分裂，外源基因會(huì)逐漸丟失。質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)能夠存在3-4天，最長(zhǎng)7-10天就會(huì)降解

        要看細(xì)胞和質(zhì)粒而定。一般情況下轉(zhuǎn)染 24～48h 后。

        瞬轉(zhuǎn)后盡量不要傳代，否則會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率，即使傳代，也最好高密度傳。